AbClon
항체공학서비스
Antibody Sequencing
항체 시퀀싱 (Antibody Sequencing) 은 단클론 항체(mAb)의 humanization, affinity maturation등의 antibody engineering, function optimization, 데이터베이스 뱅킹 및 특허 출원을 위한 필수적인 과정입니다. Hybridoma 개발 후 세포주 관리가 어려우신 경우에 항체 시퀀싱 (Antibody Sequencing) 을 추천해 드립니다. Hybridoma는 비특이적 항체를 암호화하는 가성유전자(pseudogenes) 및 mRNA를 포함할 수 있고, 이는 표적항체를 클로닝하기 위한 primer에 의해 증폭될 수 있으므로 앱클론에서는 항체에 대해 독립적인 3~5 개의 클론을 sequencing하고 Fab 형태로 생산하여 ELISA로 항원과 반응시켜 정확성을 보장합니다.
특장점
- Fab construction하여 항원과 반응하는 variable region 서열 확인
- 소요기간: 약 8~10주
- mAb 서열 분석의 풍부한 경험
고객준비사항
- Hybridoma cell (>1×106 cells)
- 항원 (50ug)
앱클론 제공
- Variable region 서열
- Variable region DNA (H-L chain)
PCR 과정
- Overlap extension PCR
ELISA 확인 후 서열 확인
- PCR을 통해 만들어진 Fab으로 항원과의 반응 확인 후 서열 확인
Antibody humanization
Mouse Monoclonal Antibody의 친화도나 활성을 유지하면서 mouse 항체의 유전자를 90% 이상 humanization (인간화)해서 humanized antibody (인간화 항체) 를 제작해 드립니다.앱클론의 항체개발 노하우가 집약되어 있는 CDR grafting 플랫폼 기술은 정확하고 신뢰도가 높습니다.
특장점
- 신뢰도 높은 CDR grafting 플랫폼
- 소요기간: 약 3개월
- 다양한 치료용 항체 개발 경험
고객준비사항
- Variable region 서열
- 항원 (500ug)
- IgG backbone (option)
앱클론 제공
- Humanized 서열
- Full IgG vector
- Affinity 분석 결과 (KD)
- Full IgG
서비스 Flow
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- 서열 분석
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- · Variable region 분석
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- Frame work 디자인
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- · Frame work 비교
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- CDR grafting
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- · hzAb 디자인
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- Humanized
항체 생산 -
- · codon optimization
- · mammalian
expression
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- Binding affinity 측정
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- · octet
Affinity maturation
앱클론의Affinity maturation (항체 최적화)는 생체 내에서 자연적으로 발생하는 affinity maturation은 somatic hypermutation과 clonal selection에 의해 일어나는데 이 원리와 항체 라이브러리 스크리닝 기술을 이용하여 in vitro 상에서 affinity를 증가시켜 드립니다. Variable region에 다양성을 부여한 라이브러리로부터 biopanning을 통해 항체 최적화(Affinity maturation) 해 드립니다. Original 항체의 Affinity를 측정한 뒤 항체의 Affinity 증진을 목적으로 CDR region에 대한 randomization을 진행하여 항체 라이브러리를 개발하고 biopanning 과정을 통해 Affinity가 개선된 항체를 선별합니다. Affinity maturation을 위해 개발된 항체 라이브러리의 다양성은 약 109이며 Octet을 이용해 affinity를 분석합니다.
고객준비사항
- Variable region 서열
- 항원 (1mg)
- 항체 (control로 사용)
- IgG backbone (option)
앱클론 제공 (TOP 5 clones)
- Affinity matured 서열
- Affinity matured variable region DNA (H-L chain)
- Affinity 측정 결과
- Full IgG
서비스 Flow
라이브러리 구축
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- Reaction confirmation
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- · Library 디자인 결정
- · Bio-panning 전략 결정
- · 항체 Affinity 확인
- · 항원 항체 확인
(BCA, SDS PAGE) - · 항원 항체 반응 확인
(Periplasmic extract)
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- Library Construction
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- · Analysis of CDR
- · CDR randomization
- · Library QC
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- Affinity Selection
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- · Bio-panning
- · Output clone의 ELISA, Sequence analysis
- · TOP 5 선정
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- Full IgG 생산 및 affinity 확인
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- · TOP 5 Full IgG 생산
- · Affinity 확인
